Определение величины интраоперационной кровопотери при эндовидеохирургических вмешательствах в урологии

Определение гемоглобинапрезентация к уроку

Слайд 1

Методы определения концентрации гемоглобина

Слайд 2

Оценка содержания гемоглобина: клиническое значение: ↓ Снижение концентрации гемоглобина: анемии (нарушение синтеза Hb , кровопотеря, гемолиз, недостаток выработки эритроцитов и т.п.)

Слайд 3

­ ↑ Повышение концентрации гемоглобина: полицитемия, гемоконцентрация при дегитратации, ожогах, упорной рвоте; пребывание на больших высотах, чрезмерная физическая нагрузка или возбуждение;

Слайд 4

­ заболевания легких, приводящие к снижению легочной перфузии, плохой аэрации легких; хроническое химическое воздействие нитритов, сульфонамидов, вызывающих образование мет- и сульфогемоглобина. ­ ↑ Повышение концентрации гемоглобина:

Слайд 5

Термин « общий гемоглобин » распространяется на совокупность форм гемоглобина , которые присутствуют в крови у здоровых людей или же появляются при патологии:

Слайд 6

окси гемоглобин ( HbO 2 ) ; восстановленный гемоглобин ( Hb) (синонимы: гемоглобин (Н Hb ++ ), феррогемоглобин ( Hb 4 ) ); карбо гемоглобин ( HbCO 2 ) (СО 2 – углекислый газ) Нормальные формы гемоглобина

Слайд 7

карбо кси гемоглобин ( HbCO) (син.: карбонмоноксигемоглобин ( HbCO) 4 ; мет гемоглобин ( MetHb), синонимы: гемИ глобин (Hb +++ ), ферригемоглобин ( Hb 4 +3 ); сульф гемоглобин ( SHb), синоним – вердоглобин S; гемИглобинцианид ( HiCN) (син.: цианметгемоглобин ( CNMetHb) ) ; и др. Патологические формы гемоглобина

Слайд 8

МЕТОДЫ АНАЛИЗА Больше всего в крови представлены: оксигемоглобин, дезоксигемоглобин, карбоксигемоглобин, метгемоглобин. Спектры поглощения оксигемоглобина (HbO 2 ), дезоксигемоглобина (Hb Н ) метгемоглобина (HbMet), карбоксигемоглобина (HbCO)

Слайд 9

Для определения гемоглобина чаще всего анализируют производные гемоглобина , образовавшиеся в процессе его окисления и присоединения к гему различных химических групп, приводящих к изменению валентности железа и окраски раствора .

Слайд 10

При количественном определении гемоглобина колориметрическими методами возникает проблема в выборе реагента , который превращал бы все производные гемоглобина только в одну форму перед фотометрическим анализом.

Слайд 11

Лучшими методами, количественно превращающими гемоглобин в его производные, оказались: гемиглобинцианидный (HbCN), гемихромный (HbChr) и гемиглобиназидный (HbN3), которые при фотометрировании дают наименьшую ошибку определения среди других методов анализа.

Слайд 12

ГемИглобинцианидный метод (метод Драбкина) (1936) Спектр поглощения цианметгемоглобина ( CNmetHb ) Принцип метода : все формы гемоглобина преобразуются в гемиглобинцианид (с помощью трансформирующего реагента (содержащего железосинеродистый калий, цианид калия и гидрокарбонат натрия) при длине волны 540 нм

Слайд 13

ГемИглобинцианидный метод (метод Драбкина) (1932) А 540 HiCN x 16114,5 x 10 -3 x P Hb (г/л)=  =367,7 x А 540 HiCN 11,0 х L А 540 HiCN — абсорбция раствора гемоглобина при длине волны 540 нм, 16114,5 — молекулярная масса мономера гемоглобина, 11,0 — коэффициент миллимолярной экстинкции цианметгемоглобина, L — длина оптического пути, равная в большинстве фотометров 10 мм, 10 -3 — перевод молярной массы гемоглобина в миллимолярную массу Р – разведение крови (1 : 251, соотношение 20 мкл крови и 5,0 мл трансформирующего раствора)

Слайд 14

Перевод гемоглобина в гемиглобинцианид осуществляется при его взаимодействии с трансформирующим раствором , содержащим феррицианид калия, цианид калия, дигидрофосфат калия и неионный детергент: Детергент усиливает гемолиз эритроцитов и предотвращает мутность, связанную с белками плазмы. Дигидрофосфат калия поддерживает уровень рН, при котором реакция проходит за 3-5 минут.

Слайд 15

Феррицианид калия окисляет все формы гемоглобина в метгемоглобин , который образует с цианистым калием гемИглобинцианид, имеющий красноватый цвет, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе. Окси гемоглобин Дезокси гемоглобин Карбокси гемоглобин Мет гемоглобин

Слайд 16

Характеристика метода Гемиглобинцианидный метод, разработанный в 1936 г. Драбкиным, был одобрен Международным Комитетом по стандартизации в гематологии (ICSH) в 1963 г. Основным достоинством гемиглобинцианидного метода является то, что HbCN (гемИглобинцианид) является стабильным производным гемоглобина, и все имеющиеся в крови формы гемоглобина могут быть быстро и количественно превращены в HbCN; Метод обеспечивает возможность получения результатов с погрешностью, НЕ превышающей ± 2%.

Слайд 17

Требования безопасности при работе с раствором, содержащим цианистые соединения При всех положительных параметрах гемиглобинцианидного метода большим его недостатком является то, что он основан на применении ядовитых цианистых соединений ;

Слайд 18

Вместо цианистого калия многие применяют маскированный цианид — ацетонциангидрин , который в процессе приготовления трансформирующего раствора распадается с образованием цианид-иона. Характер действия ацетонциангидрина на человека сходен с действием синильной кислоты , но эффект развивается медленнее . Ацетонциангидрин всасывается через кожу и может вызывать тяжелые отравления . Его предельно-допустимая концентрация (ПДК) составляет 0,9 мг/м 3 , класс опасности 2.

Слайд 20

Оптическая схема

Слайд 21

Зависимость показаний гемоглобинометра “ МиниГем-540” от времени инкубации образцов крови с трансформирующим раствором Из графика видно, что лишь на 15 минуте от начала реакции лизиса показания прибора начинают стабилизироваться и далее уже не меняются в течение последующих 2 часов . Поэтому, измерение гемоглобина следует проводить не ранее, чем через 20 минут после внесения крови в пробирку с трансформирующим раствором, когда весь имеющийся в пробирке гемоглобин преобразуется в конечный продукт реакции — цианметгемоглобин.

Слайд 22

Гемихромный метод Принцип гемихромного метода основан на переводе всех форм гемоглобина в одну — гемихром . Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе. Гемоглобин Геми-хром Трансформир. р-р: Жирные кислоты + Феррицианид К (или додецилсульфат Na)

Слайд 23

Гемихромный метод Спектр поглощения метгемоглобина ( HbMet ) Максимум кривой поглощения гемихрома находится на длине волны 533 нм . Ближайшая к 533 нм типовая длина волны – 540 нм, на которой и проводится фотометрирование с учетом коэффициента пересчета (фактора) для 540 нм .

Слайд 24

Основным достоинством гемихромного метода является то, что содержащиеся в крови Формы гемоглобина могут быть быстро и количественно превращены в HbChr при полной безвредности трансформирующего раствора

Слайд 25

Оптическая схема

Плюсы гемихромного метода определения гемоглобина

Методика определения Hb с помощью гемихромного метода имеет множество положительных сторон:

• два варианта сдачи крови: забор капиллярной или венозной жидкости;
• экспресс-диагностика, которая позволяет получить результат в день сдачи исследования;
• безопасность для сотрудников лаборатории, так как методика не использует токсические реактивы, которые могут навредить здоровью;
• использование полуавтоматического анализатора, который полностью устраняет риск врачебной ошибки на этапе подсчета клеток;
• простота метода, использование дешевых реактивов, которые экономят деньги клинического учреждения;
• точность полученных показателей, благодаря которым лечащий врач определяет состояние пациента, назначает дополнительные методы диагностики и лечение;
• необходимость использования малого количества крови для анализа, если лаборант решил, что анализ недостоверной, возможно повторное тестирование;
• использование незначительного количества реактивов для одного исследования, что позволяет распределить химические вещества на множество тестирований;
• дешевизна одного реактива, что позволяет клинике закупить множество данных химических веществ.

Минусы гемихромного метода определения гемоглобина

Методика имеет отрицательные стороны, которые учитываются врачом в постановке диагноза:

• возможность врачебной ошибки на этапе сдачи крови;
• возможность неправильного приготовления реактива, использование неверных концентрации для разведения крови;
• отсутствие возможности рассмотреть форму и размер клеток, фотометр определяет только их количество.

Показания к применению гемихромного метода

Методика для подсчета количества гемоглобина проводится в лабораториях постоянно. Для назначения исследования необходимы различные показания.

• Диспансеризация человека для определения состояния его здоровья. В этом случае исследование проводят 1 раз в год.
• Системные заболевания, вызывающие снижение гемоглобина. К ним относят недостаток витаминов и фолиевой кислоты, различные форы анемии, нарушение образования форменных элементов в костном мозге.
• Проверка здоровья беременной женщины. Во время беременности показатели могут быть незначительно или резко снижены. В первом случае терапевтические меры не требуются. Если показатель снижен значительно, назначают препараты, способствующие его повышению, так как дефицит гемоглобина может негативно сказаться на росте формирование плода.
• Проверка количества гемоглобина во время лечения. Врач корректирует дозировку лекарственных препаратов или заменяет их на другие медикаменты.

Суть гемихромного метода определения гемоглобина

Гемоглобин имеет множество различных форм. Для упрощения подсчета его количества пигмент переводят в одну форму – гемихром (HbChr). Он имеет интенсивный красный цвет и длину волны 540 нм, поэтому подсчитывается легко. Его число отображает всю концентрацию Hb в исследуемой жидкости.
Для перевода гемоглобина в гемихром использует реагенты для трансформации:

• четвертичные аммониевые основания с ПАВ;
• соли жирных кислот с добавлением ЭДТА;
• SDS.

Выпускаются новые реагенты, в составе которых отсутствуют цианиды. Они основаны на додецилсульфате натрия. Наилучшим веществом является SDS. Скорость перехода пигмента при его использовании намного выше, чем у других реактивов. Необходимо всего 5 минут. С помощью реагентов возможно использование исследования в качестве экспресс-метода. То есть возможно проведение множества анализов за 1 рабочий день. При этом пациент получает на руки готовый результат в день сдачи биологической жидкости.

В лабораториях часто используют исследования гемоглобина гемихромным методом с помощью реактивов Ольвекс. Он содержит натрия лаурилсульфат, полностью безопасный для врачей. Его достоинством является низкая стоимость при высоком качестве и продолжительном сроке годности.

Материалом для исследования является капиллярная или венозная кровь. Последний вариант используется чаще, так как исследование более достоверно. Узнайте, чем отличается анализ крови из пальца и вены.

В полученную биологическую жидкость добавляют антикоагулянт, например, ЭДТА или гепарин. Это предотвратит образование сгустка.

Исследование проводят в несколько этапов.

• В биологическую жидкость добавляют трансформирующий раствор в соотношении 20:5000 мкл. Полученный образец тщательно перемешивают. Возможно использование центрифуги. Жидкость должна тщательно перемешаться. Реагент воздействует на кровь в течение 5 минут.
• Для определения концентрации гемоглобина используют фотометр. Это оптический прибор, который подсчитывает показатель при длине волны 540 нанометров.
• Результат, полученный с помощью полуавтоматического анализатора, подставляют в формулу C =A×f, где C – концентрация гемоглобина; A – данные, полученные на фотометре; f – фактор, индивидуальный для каждого фотометра.

Полученные данные записывают на бланке исследования, передают пациенту. Он может самостоятельно сравнить результат с нормой. Но для постановки диагноза необходимо обратиться к врачу. Он выявит отклонения, назначит лечение.

На бланке исследования записывается полученные результаты, которые можно сравнить с нормой. Она разнится по возрасту и полу. Данные описаны в таблице.

Незначительное отклонение показателя не свидетельствует о появлении заболевания. Отклонение от нормы в меньшую или большую степень на несколько единиц должно быть проверено повторным исследованием. Если результат тот же, врач должен выявить причину состоянии, назначить лечение.