Взятие, условия хранения и доставки венозной крови для проведения ИФА и ПЦР

Получение дефибринированной крови. Кровь животного сли­вают в стерильную колбу со стеклянными бусами и непрерыв­но в течение 10–15 мин встряхивают. В результате встряхива­ния находящийся в крови фибрин выпадает в осадок, обвола­кивая бусы, а дефибринированная кровь, слитая в другую колбу или пробирку, утрачивает способность свертываться.

Приготовление взвеси эритроцитов. Для освобождения от пленок фибрина дефибринированную кровь фильтруют через трехслойный марлевый фильтр. Фильтрат наливают в центри­фужные пробирки и центрифугируют при 2000–3000 об./мин в течение 10–15 мин. Эритроциты оседают на дно пробирки, а прозрачная, слегка желтоватого цвета плазма образует над-осадочный слой. После центрифугирования уровень жидкости в пробирке отмечают карандашом, отделяют плазму пастеров­ской пипеткой, эритроциты промывают, доливая до метки стерильный изотонический раствор хлорида натрия, и вновь центрифугируют. Промывание эритроцитов с добавлением свежего раствора производят 2–3 раза, чтобы последняя пор­ция промывной жидкости была бесцветна.

Из промытых эритроцитов готовят 3 или 5 % взвесь, прибавляя к 3–5 мл эритроцитов соответственно 97–95 мл изо­тонического раствора хлорида натрия (для получения меньших количеств взвеси объемы обоих ингредиентов уменьшают в одинаковое число раз).

Взвесь эритроцитов можно хранить в холодильнике при температуре 3–4 °С в течение 5–6 дней.

Приготовление сыворотки крови. Кровь, собранную в сте­рильную пробирку, закрывают ватно-марлевой пробкой, ставят на 20–30 мин в термостат или водяную баню, отрегулирован­ную на 37 °С, так как в тепле кровь свертывается быстрее и лучше. При свертывании сгусток крови обычно прилипает к стенкам пробирки. Поэтому после выдерживания в термостате сгусток отделяют от стенок пробирки круговым движением капилляра стерильной пастеровской пипетки или стеклянной стерильной палочкой.

После отделения сгустка сыворотку ставят в холодильник при температуре 3–4 °С. В течение 3–4 ч сыворотка обычно отделяется полностью, и ее можно собрать стерильной пасте­ровской пипеткой. Чтобы содержимое пробирки было хорошо видно, пастеровскую пипетку соединяют со стеклянной труб­кой – «мундштуком» (резиновая трубка длиной 20–25 см). Это позволяет избежать соприкосновения кончика пипетки со сгустком крови и попадания в сыворотку эритроцитов.

Окрашенную в розовый цвет сыворотку центрифугируют при 2000–3000 об./мин в течение 10–15 мин для осаждения форменных элементов крови.

При взятии крови вскоре после кормления животных, а также при повторных кровопусканиях с короткими интервала­ми иногда возникает липемия, т.е. появление избытка жировых веществ в крови. Сыворотки, получаемые во время липемии, бывают мутные (хилезные), иногда опалесцирующие, и это очень затрудняет чтение диагностических реакций, особенно реакции преципитации. Во избежание получения мутных сы­вороток кровь у животных берут натощак. Просветление липе-мической плазмы наступает также при введении в кровеносное русло животного гепарина, способствующего повышению кон­центрации в крови фермента, называемого фактором просвет­ления. С этой целью кроликам весом 2–2,5 кг в краевую вену уха вводят за 1–1,5 ч до обескровливания 60 мг гепарина.

Сыворотку крови можно получить методом центрифугиро­вания. В слитой с осадка сыворотке через короткое время после центрифугирования образуется сгусток фибрина, кото­рый уплотняется при перемешивании крови стеклянной палоч­кой. Затем этот сгусток удаляют. В некоторых случаях фибрин из сыворотки выпадает не полностью. Для удаления остатков фибрина и выявления полноты его удаления к сыворотке при­бавляют несколько капель тромбина. Освобожденную от фиб­рина сыворотку фильтруют через асбестовые фильтры. Полученная таким способом сыворотка совершенно прозрачна и не имеет признаков опалесценции.

Приготовление цитратной крови. Полученную из сердца или вены кровь сливают в пробирку с 5 % раствором цитрата на­трия (10 мл крови, 1 мл цитрата натрия). Цитратная кровь не свертывается.

Приготовление плазмы крови. Цитратную кровь ставят на 18–20 ч в холодильник или центрифугируют. В результате над осадком эритроцитов образуется прозрачный слой жидкости желтоватого цвета – плазмы.

Лечебная сыворотка

Лечебная сыворотка — это препарат плазмы крови без фибриногена, в котором содержатся готовые антитела, борющиеся с возбудителями различных заболеваний, когда у самого организма нет времени на выработку антител. Иммунная система использует их для идентификации чужеродных объектов (вирусов и бактерий) и их нейтрализации.

Для профилактики и лечения некоторых инфекционных заболеваний используют сыворотки животных (чаще всего лошадей), иммунизированных искусственным путем. В качестве лечебно-профилактической сыворотки используется и сыворотка крови людей, перенесших инфекционное заболевание, либо искусственно иммунизированных вакцинными препаратами. Иммунные сыворотки выполняют и диагностическую роль и применяются в лабораториях для идентификации микроорганизмов, выделенных во время анализа. Диагностическая сыворотка — это сыворотка иммунизированных кроликов.

Лечебные сыворотки эффективнее, чем вакцинные препараты. Они способны быстро создавать пассивный иммунитет.

Введенные иммуноглобулины мгновенно нейтрализуют патогенные микроорганизмы, а также токсические продукты, являющиеся результатом их жизнедеятельности.

Но у гетерогенных, то есть чужеродных сывороток есть и недостаток — действие пассивного иммунитета, обусловленного им, кратковременно. Иммуноглобулины выводятся из организма через 1-2 недели. Обусловлено это естественным процессом распада белков, а также действием образовавшихся антител.

Более длительный эффект дает инъекция гомологичной сыворотки (сыворотки человека). В этом случае антитела циркулируют в организме человека 4-5 недель. Связано это с тем, что происходит более медленное разрушение введенных белков.

Классификация лечебных сывороток

Исходя из направленности и особенностей действия лечебных сывороток, они делятся на:

• антибактериальные;
• антивирусные;
• антитоксические;
• гомологичные (из крови человека);
• гетерогенные (сыворотки либо иммуноглобулины).

Антибактериальные сыворотки получают путем гипериммунизации лошадей с помощью соответствующих убитых бактерий. В этих препаратах содержатся антитела, имеющие опсонизирующие, литические, агглютинирующие свойства. Эти сыворотки не очень эффективны, поэтому не нашли широкого применения. Относятся они к нетитруемым препаратам, потому что общепринятой единицы для измерения их лечебного действия нет. Очистка и концентрация антибактериальных сывороток проводится методом, основанным на разделении белковых фракций и выделении с помощью этилового спирта при низкой температуре активных иммуноглобулинов. Это называется методом водно-спиртового осаждения на холоде.

Антивирусные сыворотки получают из сыворотки животных, иммунизированных вирусами или штаммами вирусов. Некоторые из этих препаратов делают методом водно-спиртового осаждения.

Антитоксические сыворотки (противостолбнячная, противодефтирийная, противогангренозная, противоботулиническая) получают путем иммунизации лошадей, применяя для этого возрастающие дозы анатоксинов, а затем и соответствующие токсины. Препараты подвергают очистке и концентрации, проводят контроль на безвредность и апирогенность. После этого сыворотки титруют, то есть определяют, сколько антитоксинов содержится в одном миллилитре препарата. Для измерения количества антител или специфической активности сыворотки используют метод, основанный на их способности нейтрализовать соответствующие токсины. Существуют единица измерения активности препарата, принятая ВОЗ. Это Международные антитоксические единицы. Для титрования антитоксических сывороток используют один из трех методов: по Району, Ремеру или Эрлиху.

Иммуноглобулины

Иммуноглобулины (гомологичные препараты) из крови человека делают 2-х видов — противокоревой и препараты направленного действия. Такие иммуноглобулины имеют преимущество перед гетерогенными, потому что антитела в них способны циркулировать в организме более длительное время и почти нереактогенны. Эти препараты, как правило, не вызывают побочных реакций. Гетерогенные сыворотки могут вызвать анафилактический шок или сывороточную болезнь.

Для получения противокоревого иммуноглобулина используют донорскую, плацентарную или абортную кровь, содержащую антитела не только против вируса кори, но и против гепатита, гриппа, возбудителей коклюша, полиомиелита и ряда других бактериальных и вирусных инфекций.

Для изготовления иммуноглобулинов направленного действия привлекают добровольцев. Их кровь подвергается специальной иммунизации против конкретной инфекции. Такие препараты отличаются повышенной концентрацией антител. Получают иммуноглобулины направленного действия для лечения бешенства, гриппа, оспы, столбняка, клещевого энцефалита, стафилококковых инфекций.

Белки молочной сыворотки – сывороточный протеин

Сывороточный протеин – самый популярный источник протеина, поскольку он имеет высочайшую биологическую ценность и быстро усваивается. Сыворотка считается наиболее полным источником белка, поскольку она содержит высокие концентрации девяти незаменимых аминокислот, которые организм не может синтезировать. Таким образом, сывороточный протеин отлично подходит для развития мышц.

Выделяют следующие составы сывороточных белков:

Изолят сывороточного протеина

– порошок белка самого высокого качества. Это идеальный продукт для тех, кто не хочет жертвовать качеством протеина. Чистая порошковая форма имеет содержание белка не менее 90%, минимальное количество жира (<1%) и углеводов и не содержит лактозы или с низким содержанием лактозы. Он рекомендуется для дополнительного потребления белка и в качестве быстрого источника белка после тренировки, и его можно идеально включить в свой рацион.

Гидролизат сывороточного протеина.

В зависимости от степени гидролиза размер белковых цепей можно контролировать. Чем больше пептида, тем короче цепь и тем быстрее всасывается белок. Рекомендуется принимать утром, до или вскоре после физической активности. Идеально подходит для фазы наращивания мышечной массы. Содержание белка 80-90%
Концентрат сыворотки – является наиболее часто используемым. Его можно получить путем концентрирования из белковой сыворотки. Он содержит значительно больше жиров и углеводов, чем изолят сыворотки, поэтому имеет более низкое содержание белка (70-80%). Рекомендуется для увеличения мышечной массы и вписать её в общий рацион питания.

Изготовление сухой молочной сыворотки

Это основной технологический процесс, при котором из сыворотки удаляются немаловажные количества лактозы и жира, после чего в процессе высокотемпературной сушки образуется сывороточный белок. Этот процесс используется для более дешевых концентратов сыворотки, где белок из-за своей высокой температуры сильно денатурирован и имеет более низкую биодоступность, чем порошки сыворотки, полученные более дорогим способом.

Использование сыворотки?

• Сыворотка – отличная основа для выпечки, приготовления пищи или фитнеса.
• Из неё можно приготовить фруктовый смузи.
• Можно использовать в супах или вареных компотах.
• Вы можете приготовить на ней тесто и рис, а также картофель.
• Мясо, замаринованное в сыворотке, будет очень вкусным и рассыпчатым.
• При выпечке её можно использовать вместо воды, можно делать хлеб, торты, тесто, пиццу и даже вафли.

Плюсы

• В составе сыворотки содержится 80% минеральных веществ молока (Ca, Fe, Mg, P, K, Na, Zn, Cu, Mn, Se).
• Витамины: A, C, B1, B2, B6, B12.
• Источник белка.
• Соотношение сыворотки, лактозы и белка очень похоже на грудное молоко.
• Она поддерживает работу печени и пищеварительной системы.
• Она помогает перистальтическому движению кишечника, способствует балансу кишечной флоры, тем самым уменьшая кишечные жалобы и улучшая самочувствие.
• Она содержит ценные незаменимые и заменимые аминокислоты, которые необходимы для развития мышц.
• Она может помочь при аллергии и слабости иммунитета.
• Полезна при заболеваниях и воспалениях суставов.
• Отлично подходит во время диеты, помогая предотвратить разрушение мышц в дополнение к низкому потреблению углеводов и калорий.